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气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞bcl2及bax相关凋亡因子的表达

来源:  作者:荣晓凤 李荣亨 王维  [字体: ]

【摘要】   目的 观察气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞的凋亡及bcl2、bax相关凋亡因子的表达。方法 采用饥饿、疲劳、寒冷、惊吓等综合因素方法复制气虚血瘀证大鼠模型,观察大鼠胸主动脉血管内膜形态学,检测血管平滑肌细胞的凋亡指数及bcl2、bax蛋白的表达。结果 气虚血瘀大鼠血管内膜明显增殖,血管平滑肌细胞bcl2蛋白表达增高(96.15±0.02 vs 21.13±0.05);bax蛋白表达降低(1.05±0.12 vs 68.06±0.06);bcl2/bax增高(2.92±0.67 vs 0.01±0.01)(P<0.05)。结论 气虚血瘀证大鼠存在血管平滑肌细胞增殖和凋亡严重失调等病理生理基础。

【关键词】   气虚血瘀证;血管平滑肌细胞;细胞凋亡

  【Abstract】 Objective To observe the apoptosis and the expression of of bcl2 and bax in the vascular smooth muscle cells of rats with qideficiency and blood stasis syndrome. Methods The rats model with qideficiency and blood stasis syndrome were induced by exertion, starvation, cold and high fat food. The morphology of the thoracic aorta intima was observed, and the apoptosis index (AI) and the expression of protEin bcl2 and bax in the vascular smooth muscle cells were measured. Results The thoracic aorta intima apparently proliferated in model group (P<0.05), the level of protEIn bcl2 in the vascular smooth muscle cells was significantly higher(96.15±0.02 vs 21.13±0.05, P<0.05) and the level of protein bax in the vascular smooth muscle cells was significantly lower than that of normal control group(1.05±0.12 vs 68.06±0.06, P<0.05). The ratio of bcl2 and bax was higher(2.92±0.67 vs 0.01±0.01, P<0.05). Conclusions There are pathological basis, such as the unbalance of the vascular smooth muscle cells proliferation and apoptosis in rats with qideficiency and blood stasis syndrome.

  【Key words】 Qideficiency and blood stasis syndrome; Vascular smooth muscle cells;Apoptosis

  气虚血瘀趋向是 现代 人群一个突出的体质病 理学 特征〔1〕,气虚血瘀证是临床多个学科、多种疾病常见中医证候之一,尤其在心脑血管疾病等老年慢性疾病中更为常见。 老年冠心病的病机关键是气虚血瘀,而主要病理变化在内皮功能失调(ED)〔2〕,ED同时也是动脉粥样硬化(AS)的启动步骤〔3〕。因此保护血管内皮细胞(VEC),防治AS是防治心脑血管疾病的关键措施。本实验选用老龄大鼠,采用饥饿、疲劳、寒冷、惊吓等综合因素方法复制气虚血瘀证模型〔4~6〕,首次观察气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞的凋亡及bcl2、bax相关凋亡因子的表达,从细胞凋亡分子生物学角度探讨气虚血瘀的病理生理基础,为临床 治疗 心脑血疾管病等老年慢性疾病提供实验依据。

   1 材料与方法

  1.1 动物 SD大鼠24只,18月龄,雌雄各半(体重600~800 g),由重庆医科大学动物实验中心提供,生产许可证号:SCXK(渝)20070001。

  1.2 主要仪器及试剂 DGB/20002A台式干燥箱(重庆实验设备厂),HWS40B恒温水浴箱(江苏太仓市实验设备厂),Lecia切片机(美国LECIA公司),恒温冰箱(日本三洋公司),HITACHI7500型透射电镜(上海玛登仪器有限公司)。bcl2及bax蛋白多克隆抗体、链霉卵白素过氧化物酶(SP)9001、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(北京中杉生物技术公司),细胞凋亡试剂盒(第三军医大学),蛋白酶K(sigma公司)。

  1.3 方法

  1.3.1 造模 空白对照组、造模组各12只,实验大鼠采用饥饿、疲劳、寒冷、惊恐刺激及高脂饮食4 w制作气虚血瘀证模型,方法:实验大鼠按每日40 g/kg体重提供饲料,每日上午8:00给予全日量的2/3,晚上20:00给予余下的1/3;每日放入10℃冷水中,以木棒追打强迫游泳直到疲劳;并将特制脂肪乳饮食按5 ml/kg加入实验大鼠饮水中。观察大鼠的体重、精神、舌质等,检测血流变学,其中模型组大鼠死亡2只。

  1.3.2 标本采集及检测 耐疲劳时间:以游泳大鼠第一次 自然 下沉为度,测出开始游泳到捞出水面所用的时间。双球直管式检测。造模4 w后,将大鼠麻醉,取一段胸主动脉血管光镜下观察血管内膜、中膜情况。另取一段胸主动脉血管于透射电镜下观察。大鼠平滑肌细胞凋亡检测采用缺口末端原位标记法。bcl2、bax的检测:SP染色,按说明书所述方法进行,因标本取材不良,故各组标本数n=8。

  1.4 统计学处理 采用SPSS10.0软件包,数据以x±s表示,组间比较采用单因素方差分析,采用SNK检验法。

   2 结 果

  2.1 气虚血瘀证大鼠模型鉴定 造模结束后,模型组大鼠不同程度出现倦怠嗜睡、精神萎顿、粪便稀溏、毛发干燥、舌质紫暗、眼球暗红等气虚血瘀症状。造模后大鼠体重(520.25±60.652) g较造模前体重(692.02±66.352) g明显减轻(P<0.05);模型组大鼠耐疲劳时间(4.45±1.54) min较空白对照组(8.89±2.09) min明显缩短(P<0.05);各项血液流变学指标较正常大鼠明显增高(P<0.01,P<0.05),见表1。

  2.2 大鼠血管平滑肌细胞凋亡及bcl2和bax表达 模型组大鼠血管平滑肌细胞凋亡指数(3.19±0.03) %较空白对照组(90.75±0.01) %明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠bcl2蛋白表达阳性率较空白对照组明显增高,bax蛋白表达阳性率明显降低,bcl2/bax比值明显增高(P<0.05),见表2。

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